Para quien no sepa de que va el tema, una breve introducción:
El material genético es lo que hace que te parezcas a papá y mamá y no al frutero (en caso contrario, medítalo profundamente...). El material genético viene en "blisters" de una vistosa molécula llamada ADN. El ADN se transcribe a ARN y éste, a su vez, se traduce a proteínas, que es con lo que está construido tu cuerpo serrano (a no ser que seas una forma de vida basada en el silicio, en cuyo caso ponte rápidamente en contacto conmigo, que prometo llevarte al circo...).
In the cell, everything is fine..., originalmente cargada por Kerikion.
Mi trabajo en el laboratorio consiste en hacer uno de esos pasos a la inversa: pasar de ARN a ADN, a través de una reacción llamada RT-PCR, patrocinada por esos bichitos tan majos que son los retrovirus.
Para llevar a término la misión es por tanto imprescindible aislar el ARN del sujeto experimental, operación que se realiza mediante una avanzada tecnología conocida como mortero (sí, como el alli-oli...).
Bien, pues es este paso el que no me sale. Caca.
P.S.: y encima me he quemado dos dedos con el nitrógeno líquido... ¡ouch!
Dios no juega a los dados con el universo
Dios no sólo juega a los dados con el universo, si no que a veces los tira donde no podemos verlos.
Los dados sólo están para hacer ruido detrás de la pantalla de DungeonMaster (tm)
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Killo! Nosotros estamos haciendo ahora RT-PCRs en el labo, bueno, más ke nosotros las hace mi jefa mientras yo miro pero eso es un tema aparte ;)
Ten mucho cuidadín con el material, no sé ke estarás usando pero ten en cuenta ke tiene ke estar en frío la mayoría del tiempo por no decir siempre para ke no actúen las RNasas, intenta contaminarlo lo menos posible (material RNasa free, con DEPC y demás)y nunca nunca lo tokes sin guantes! ¿Usas un kit? cuéntame a ver si te puedo echar una mano! Además es posible ke no obtengas gran cantidad de RNA del tejido, igual tienes ke juntar varias muestras iguales para tener un pokitín más con el ke obtener algo de cDNA para la amplificación, ke el RNA =kakita de vakita.
Con las in situs era un peñazo igual, en cuanto te descuidabas lo tenías todo degradado y así no había manera...
Un besote!
Y no te vuelvas loco!
Miriam
Gracias!
La verdad es que no se muy bien en que paso falla el proceso. Se supone que este protocolo lo usan aquí de rutina (y es el que usé la otra vez que estuve...) y funcionaba. Todo el material está esterilizado a 180, para inactivar las RNasas. Macero con nitrógeno líquido y luego añado trizol. Le añado cloroformo, centrifugo y me quedo la fase superior. Precipito con isopropanol, lavo con alcohol de 75 frío y dejo secar el pellet al aire. Luego lo resuspendo en agua miliQ y a la nevera. Añado sample buffer y loading buffer y lo cargo en geles 8% de agarosa en TAE 1x, pero nah... el primer día salieron unas bandas muy tenues y desde entonces nada...
No se... mañana veremos, a ver que dice el jefe. el RNA es lo que tiene. Gracias por preocuparte :) Espero que a vosotros os vaya muuucho mejor.
Q dibu mas bonito! me pregunto de donde lo habrás sacado...
Papiroloca
JeJe... lo que quiere, aquí la taimada, es que diga que lo he hecho con la wacom que me regaló estas navidades, y que me he traído a mi exilio porque me gustó mucho (y porque me recuerda un poquito a ella, de paso...).
Nooooo, q va.... nada mas lejos de mi intención, pero ya qlo dices, fue un regalo cojonudo, ¿a q si?
Papiroloca
:P
Sí, sí que lo fue... aunque tú sigues siendo lo mlejor de todo ;)
Nosotros usamos tioisocianato d guanidino en lugar d trizol, aunq creo q es lo mismo pero en no-comercial.
El Trizol (tm) es una marca comercial de fenol... osea, que es la extracción en dos fases fenol/cloroformo de ácidos nucléicos de toda la vida... solo que en eppendorfs.
Q bien q no me dejan jugar con ARn, Chupi!!
papiroloca
Te voy a mandar nuestro protocolo x mail, a ver si te sirve d algo.
Gracias! Hoy estoy viendo como lo hace el becario de aquí y lo hace igual que yo... creo que le voy a coger prestados los reactivos, por si los míos están chungos...
Te ha llegado el mail? No confio en mi capacidad d retención d una dirección de una página a otra :S
Sí llego! Mil gracias, maja, ahora le echo un ojo... :)